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液相色谱仪是这么工作的,原来也不复杂

点击次数:244  发布时间:2020-02-13
  液相色谱仪是一种常用的色谱仪产品,主要由储液器、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成,被广泛用于多个领域中。
 

液相色谱仪

  液相色谱仪检测的对象是高沸点、难气化的大分子化合物,其具有高效、快速、灵敏的特点,在生物医药研究、检测方面有较多的应用。然而,在使用液相色谱仪检测生物医药上的样品时,由于行业特性,样品中的蛋白质残留,时常会对液相色谱柱造成污染。
  工作原理:
  分配系数与组分、流动相和固定相的热力学性质有关,也与温度、压力有关。在不同的色谱分离机制中,K有不同的概念:吸附色谱法为吸附系数,离子交换色谱法为选择性系数 (或称交换系数),凝胶色谱法为渗透参数。但一般情况可用分配系数来表示。
  在检测生物物质如血浆或血清等积累在反相色谱柱上,必须采用不同与其他物质的清洗方法。大部分情况下,纯有机溶剂如乙晴或甲醇不溶解多肽和蛋白质,因此不能有效地清洗柱子。反而,有机溶剂和缓冲液、酸、离子对试剂等的混合物则能有效地溶解。为确保液相色谱柱再生的效果,建议在使用溶剂冲洗色谱柱之前,了解色谱柱的填料类型以及确保使用的溶剂能与柱子的填料相容。硅胶基质的柱子通常来说都是相容的,但有机聚合物基质的柱子可能会在某些溶剂组合中膨胀或收缩,这样会影响色谱柱的柱效。
  在使用指定溶剂清洗反相色谱柱时,须对每个溶剂系统至少要冲洗20体积。由于有些溶剂系统黏性很大,冲洗的流速应该相应调整以确保不会超过泵压。当检测的是尿液等样品溶液时,至少应该用40~50体积的HPLC级水来冲洗柱子。
  液相色谱法只要求样品能制成溶液,不受样品挥发性的限制,流动相可选择的范围宽,固定相的种类繁多,因而可以分离热不稳定和非挥发性的、离解的和非离解的以及各种分子量范围的物质。
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