色谱图(chromatogram):样品流经色谱柱和检测器,所得到的信号-时间曲线,又称色谱流出曲线(elution profile)。色谱图是用来观察色谱行为和研究色谱理论的重要标尺;可以根据保留时间对未知化合物进行定性,根据色谱图上测得的峰高或峰面积进行定量,根据各峰不同位置及峰宽变化状态,可以对色谱柱的分离效率进行评价,并根据色谱图的状态来判断操作条件的优劣。
色谱峰(peak):色谱柱流出组分通过检测器系统时所产生的响应信号的微分曲线。
峰高(peak height,h):从峰的zui大值到峰底的距离。
峰宽(peak width,W):在峰两侧拐点处所作切线与峰底相交两点之间的距离。
半峰宽(peak width at half-height,Wh/2):通过峰高的中点作平行于峰底的直线,此直线与峰两侧相交两点之间的距离。
峰面积(peak area,A):峰与峰底所包围的面积。
脱尾峰(tailing peak):后沿较前沿平缓的不对称峰。
前伸峰(leading peak):前沿较后沿平缓的不对称峰。
鬼峰(ghost peak):并非样品所产生的峰。
畸峰(distorted peak):形状不对称的峰,如脱尾峰,前伸峰等。
基线(base line):在正常操作条件下,仅有流动相通过检测器时所产生的响应信号曲线。
基线漂移(drift):基线随时间定向的缓慢的变化。主要由于操作条件如电压、温度、流动相及流量的不稳定所引起,柱内的污染物或固定相被洗脱下来也会产生漂移。
基线噪音(noise):基线信号的波动。通常因电源接触不良或瞬时过载、检测器不稳定、流动相含有气泡或色谱柱被污染所致。
谱带扩展(Band Broadening):由于纵向扩散,传质阻力等因素的影响,使组分在色谱柱内移动过程中谱带宽度增加的现象。
拖尾因子(tailing factor,T):用以衡量色谱峰的对称性。《中国药典》规定T应为0.95~1.05。T<0.95为前延峰,T>1.05为拖尾峰。
死时间(dead time,t0):不保留组分的保留时间。即流动相(溶剂)通过色谱柱的时间。在反相HPLC中可用苯磺酸钠来测定死时间。
死体积(dead volume,V0):由进样器进样口到检测器流动池未被固定相所占据的空间。它包括4部分:进样器至色谱柱管路体积、柱内固定相颗粒间隙、柱出口管路体积、检测器流动池体积。
保留时间(retention time,tR):从进样开始到某个组分在柱后出现浓度极大值的时间。
保留体积(retention volume,VR):从进样开始到某组分在柱后出现浓度极大值时流出溶剂的体积。又称洗脱体积。VR=F×tR
调整保留时间(adjusted retention time,t'):扣除死时间后的保留时间。t'R=tR-t0
调整保留体积(adjusted retention volume,V'R):扣除死体积后的保留体积。
理论塔板数(theoretical plate number,N):用于定量表示色谱柱的分离效率(简称柱效)。N取决于固定相的种类、性质(粒度、粒径分布等)、填充状况、柱长、流动相的种类和流速及测定柱效所用物质的性质。在一张多组分色谱图上,如果各组分含量相当,则后洗脱的峰比前面的峰要逐渐加宽,峰高则逐渐降低。用半峰宽计算理论塔数比用峰宽计算更为方便和常用,因为半峰宽更易准确测定,尤其是对稍有拖尾的峰。N与柱长成正比,柱越长,N越大。用N表示柱效时应注明柱长,如果未注明,则表示柱长为1米时的理论塔板数。
理论塔板高度(theoretical plate height,H):每单位柱长的方差。
分配系数(distribution coefficient,K):在一定温度下,化合物在两相间达到分配平衡时,在固定相与流动相中的浓度之比。
分离度(resolution,R):相邻两峰的保留时间之差与平均峰宽的比值。表示相邻两峰的分离程度。