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如何清洗液相色谱硅胶键合反相柱上的蛋白质残余

点击次数:1871  发布时间:2015-12-23

液相色谱仪检测的对象是高沸点、难气化的大分子化合物,其具有、快速、灵敏的特点,在生物医药研究、检测方面有较多的应用。然而,在使用液相色谱仪检测生物医药上的样品时,由于行业特性,样品中的蛋白质残留,时常会对液相色谱柱造成污染。本文主要介绍液相色谱硅胶键合反相柱上的蛋白质残余清洗方法。
在检测生物物质如血浆或血清等积累在反相色谱柱上,必须采用不同与其他物质的清洗方法。大部分情况下,纯有机溶剂如乙晴或甲醇不溶解多肽和蛋白质,因此不能有效地清洗柱子。反而,有机溶剂和缓冲液、酸、离子对试剂等的混合物则能有效地溶解。为确保液相色谱柱再生的效果,建议在使用溶剂冲洗色谱柱之前,了解色谱柱的填料类型以及确保使用的溶剂能与柱子的填料相容。硅胶基质的柱子通常来说都是相容的,但有机聚合物基质的柱子可能会在某些溶剂组合中膨胀或收缩,这样会影响色谱柱的柱效。
    在使用指定溶剂清洗反相色谱柱时,须对每个溶剂系统至少要冲洗20体积。由于有些溶剂系统黏性很大,冲洗的流速应该相应调整以确保不会超过泵压。当检测的是尿液等样品溶液时,至少应该用40~50体积的HPLC级水来冲洗柱子。
    对于反相柱子,不建议用表面活性剂如十二烷基磺酸钠(SDS),因为这些化合物必然会牢固吸附在硅胶键合相柱子上很难除去。用表面活性剂会影响装填表面而改变其性质。然而有一个分离小组的研究表明由某个小组做的污染后的柱子可以用500μL1%SDS溶液用1ml/min的流速清除下多肽合成产物。如果继续用从5%~95%含1%的乙晴梯度洗脱,可以恢复多肽的分离。
 

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